第三節(jié) 電泳法
熟悉電泳法的基本原理和常用的電泳方法。
了解毛細(xì)管電泳法的基本原理。
一、基本原理
電泳遷移速度 ν=μE
在相同電場強(qiáng)度下,兩組分分離程度取決于二者淌度之差。電泳分離后各組分的相對(duì)位置由組分的電泳泳動(dòng)和緩沖液電滲共同決定。
影響電泳分離的條件包括:
1.緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度:pH直接影響組分的荷電情況,是電泳分離的最重要條件。離子強(qiáng)度太小則緩沖容量不足,區(qū)帶易擴(kuò)散;太大則組分移動(dòng)慢,發(fā)熱嚴(yán)重。
2.電場強(qiáng)度:電場強(qiáng)度越大分離越完全,大于20V/cm時(shí)發(fā)熱嚴(yán)重。
3.樣品濃度:通常以1%為宜。太濃拖尾,太稀測定結(jié)構(gòu)精密度差。
二、各類電泳法
1.紙電泳法 2.醋酸纖維素電泳法 3.瓊酯糖凝膠電泳法 4.聚丙烯酰胺凝膠電泳法 5.SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法
三、毛細(xì)管電泳法
以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場為驅(qū)動(dòng)力,依照樣品中各組分之間淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的方法。
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