第二節(jié) 氣相色譜法和高效液相色譜法

　　掌握氣相色譜法和高效液相色譜法的基本原理;色譜系統(tǒng)適用性試驗的主要內容;氣相色譜法和高效液相色譜法在藥物鑒別、檢查和含量測定中的應用。了解氣相色譜儀和高效液相色譜儀的基本結構。

　　一、氣相色譜法： 以氣體為流動相的色譜法，具有分離效能高、靈敏度高、樣品用量少、分析速度快等優(yōu)點，不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質分析。

　　(一)基本原理

　　1.基本概念

　　色譜峰參數(shù)：峰高或峰面積(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰寬(用于衡量柱效)

　　保留值：保留時間、死時間、調整保留時間

　　峰寬：標準差、半峰寬、峰寬

　　2.塔板理論：把組分在兩相間的連續(xù)轉移過程，分解為間歇的在單個塔板中的分配平衡過程

　　理論塔板數(shù) n=5.54(tR/Wh/2)2

　　色譜柱的理論塔板數(shù)越多，柱效越高;同樣長度中塔板高度越小，柱效越高。

　　3.速率理論：主要說明使色譜峰擴張而降低柱效的因素

　　范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

　　A為渦流擴散項。采用適當粒度、均勻的填料并填充均勻可減小渦流擴散，開管毛細管柱A=0

　　B為縱向擴散系數(shù)。為減小縱向擴散可采用較高的載氣流速;或選擇分子量大的重載氣;也可降低柱溫。

　　C為傳質阻抗系數(shù)。在能完全覆蓋載體表面的前提下，應適當減少固定液用量。

　　范氏方程說明填充均勻程度、載體粒度、載氣種類、載氣流速、柱溫、固定液層厚度對柱效的影響。

　　(二)氣相色譜儀

　　1.氣源：FID常用載氣多為氮氣或氦氣;TCD多用氦氣或氫氣為載氣;ECD多用氮氣或氬氣

　　2.進樣及汽化系統(tǒng)

　　3.色譜柱和柱溫箱

　　4.檢測器

　　熱導檢測器TCD：濃度型檢測器。構造簡單、測定范圍廣、樣品不破壞，但靈敏度較低。

　　電子捕獲檢測器ECD：靈敏度高、選擇性好。對無電負性基團的化合物響應低。

　　氫離子火焰檢測器FID：質量型檢測器。靈敏度高、響應快、線性范圍寬，最常用。

　　(三) 應用 1.鑒別：利用保留值進行鑒別。

　　2.檢查

　　(1) 內標法加校正因子測定供試品中某個雜質含量

　　(2) 外標法測定供試品中某個雜質或主成分含量

　　(3) 加校正因子的主成分自身對照法

　　(4) 不加校正因子的主成分自身對照法

　　(5) 面積歸一化法：一般不用于微量雜質檢查

　　3.含量測定：外標法，內標法

　　內標物要求：①原樣品中不含有的組分;②保留時間與待測組分相近，但能完全分離;③純度合乎要求。

　　二、高效液相色譜法

　　(一)速率理論：高效液相色譜法中影響柱效主要因素為渦流擴散項和傳質阻抗項。由于液體黏度比載氣大得多，而且柱溫多為室溫，其縱向擴散項很小，可忽略不計。范氏方程簡化為 H=A +Cμ

　　(二) 高效液相色譜儀： 1.高壓輸液泵 2.色譜柱：分析型和制備型 3.進樣閥 4.檢測器：①固定波長檢測器;②可變波長檢測器;③光二極管陣列檢測器

　　(三)應用：與氣相色譜法相似

　　三、色譜系統(tǒng)適用性試驗方法

　　1.理論塔板數(shù)：不得低于各品種項下規(guī)定的最小理論塔板數(shù)

　　2.分離度：除另有規(guī)定外，分離度應大于1.5

　　3.重復性：取各品種項下對照品2連續(xù)進樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標準偏差不大于2.0%

　　4.拖尾因子：除另有規(guī)定外，拖尾因子應在0.95～1.05之間