三、選擇題

　　1.A 2.D 3.C 4.C 5.A 6.C 7.A 8.A 9.D 10.B

　　11.C 12.B 13.D 14.C 15.C 16.B 17.A 18.C 19.E 　20.A 　21.E 　 22.D 　23.C　 24.B　 25.C 26.C 　 27.C 　28.D　　29.D　 30.C　　31.B 　32.B 33.D　　34.D 　 35.A

　　四、是非題

　　1.錯(cuò) 2.對(duì) 3.錯(cuò) 4.錯(cuò) 5.錯(cuò) 6.錯(cuò) 7.對(duì) 8.錯(cuò) 9.錯(cuò) 10.對(duì)

　　11.錯(cuò)12.對(duì) 13.錯(cuò) 14.對(duì) 15.對(duì) 16.錯(cuò) 17.對(duì) 18.錯(cuò) 19.錯(cuò) 20.對(duì)

　　21.對(duì) 22.對(duì)23.錯(cuò) 24.對(duì) 25.錯(cuò)

　　五、問答題

　　1.要點(diǎn)：①將E.coli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)十幾代，使所有DNA分子標(biāo)記上l5N;②將15N標(biāo)記的E.coli再放人普通的14N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在細(xì)胞生長一代、二代…幾代的時(shí)間間隔內(nèi)采樣;③采用氯化銫密度梯度離心分離DNA，并用紫外照相技術(shù)檢測(cè)DNA所在位置;④其結(jié)果確切地證明DNA以半保留方式復(fù)制。

　　2. 1958年由Crick提出以DNA為中心的遺傳信息的傳遞規(guī)律，即DNA貯存的遺傳信息通過復(fù)制傳給子代DNA，通過轉(zhuǎn)錄傳給RNA，再通過翻譯傳給蛋白質(zhì)。1970年Temin和 Baltimore發(fā)現(xiàn)RNA病毒的RNA可通過反向轉(zhuǎn)錄將遺傳信息傳給cDNA，也可通過RNA復(fù)制或RNA轉(zhuǎn)錄傳給子代RNA，這是中心法則的補(bǔ)充。中心法則揭示了遺傳信息的流向。(見名詞解釋)。

　　3.①拓?fù)洚悩?gòu)酶：松解DNA的螺旋或超螺旋;②解鏈酶：打開DNA的雙鏈;③引物酶：在DNA復(fù)制的起始處以DNA為模板，催化合成互補(bǔ)的RNA短片段;④DNA聚合酶：以DNA為模板、dNTP為原料，合成互補(bǔ)的DNA新鏈;⑤連接酶：連接DNA片段;⑥D(zhuǎn)NA結(jié)合蛋白：結(jié)合在打開的DNA單鏈上，起到穩(wěn)定單鏈的作用。

　　4.E.coli DNA聚合酶Ⅰ是多功能酶，具有：①DNA聚合酶活性，能按模板要求，以5'→3'方向合成DNA，在DNA復(fù)制中，常用以填補(bǔ)引物切除后留下的空隙;②5'→3'外切酶活性，DNA復(fù)制后期，用于切除RNA引物;③3'→5'外切酶活性，用以校對(duì)復(fù)制的正確性，當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)配堿基時(shí)，切除錯(cuò)配堿基直到正確配對(duì)為止;DNA聚合酶Ⅰ不是DNA復(fù)制和校正中的主要聚合酶，它的功能主要是修復(fù)。

　　5.以E.coli為例，DNA復(fù)制過程分三個(gè)階段：①起始：從DNA上控制復(fù)制起始的序列即起點(diǎn)開始復(fù)制，形成復(fù)制叉，復(fù)制方向多為雙向，也可以是單向，若以雙向進(jìn)行復(fù)制，兩個(gè)方向的復(fù)制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA復(fù)制需要有含3'-OH的引物，引物由含有引物酶的引物體合成一段含3～10個(gè)核苷酸的RNA片段;②延長：DNA復(fù)制時(shí)，分別以兩條親代DNA鏈為模板，當(dāng)復(fù)制叉沿DNA移動(dòng)時(shí)，以親代3'→5'鏈為模板時(shí)，子鏈的合成方向是5'→3'，可連續(xù)進(jìn)行，以親代5'→3'鏈為模板時(shí)，子鏈不能以3'→5'方向合成，而是先合成出許多5'→3'方向的岡崎片段，然后連接起來形成一條子鏈;③終止：當(dāng)一個(gè)岡崎片段的3'—OH與前一個(gè)岡崎片段的5'—磷酸接近時(shí)，復(fù)制停止，由DNA聚合酶Ⅰ切除引物，填補(bǔ)空隙，DNA連接酶連接相鄰的DNA片段。DNA復(fù)制時(shí)，由DNA解旋酶(又稱解鏈酶)通過水解ATP獲得能量來解開DNA雙鏈，并沿復(fù)制叉方向移動(dòng)，所產(chǎn)生的單鏈很快被單鏈結(jié)合蛋白所覆蓋，防止DNA復(fù)性并保護(hù)其單鏈不被降解，復(fù)制叉前進(jìn)過程中，雙螺旋產(chǎn)生的應(yīng)力在拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用下得到調(diào)整。

　　DNA復(fù)制基本規(guī)律：①復(fù)制過程為半保留方式;②原核生物單點(diǎn)起始，真核生物多點(diǎn)起始，復(fù)制方向多為雙向，也有單向;③復(fù)制方式呈多樣性，(直線型、θ型、滾動(dòng)環(huán)型…等);④新鏈合成需要引物，引物RNA長度一般為幾個(gè)～10個(gè)核苷酸，新鏈合成方向5'→3'，與模板鏈反向，堿基互補(bǔ);⑤復(fù)制為半不連續(xù)的，以解決復(fù)制過程中，兩條不同極性的鏈同時(shí)延伸問題，即一條鏈可按5'→3'方向連續(xù)合成稱為前導(dǎo)鏈，另一條鏈先按5'→3'方向合成許多不連續(xù)的岡崎片段(原核生物一般長1000～2000個(gè)核苷酸，真核生物一般長100～200個(gè)核苷酸)，再通過DNA連接酶連接成完整鏈，稱后隨鏈，且前導(dǎo)鏈與后隨鏈合成速度不一致，前者快，后者慢;⑥復(fù)制終止時(shí)，需切除前導(dǎo)鏈、岡崎片段的全部引物，填補(bǔ)空缺，連接成完整DNA鏈;⑥修復(fù)和校正DNA復(fù)制過程出現(xiàn)的損傷和錯(cuò)誤，以確保DNA復(fù)制的精確性。

　　6.1958年Meselson和Stahl設(shè)計(jì)了一個(gè)實(shí)驗(yàn)證明了DNA的復(fù)制為半保留復(fù)制。他們把大腸桿菌在含有15N的單一氮源(NH4C1)中培養(yǎng)很多代后轉(zhuǎn)移到僅含14N的培養(yǎng)介質(zhì)中，使所有細(xì)胞增殖一代，從這些第一代細(xì)胞制備的DNA仍然在CsCl密度梯度中形成單一的帶，但它的密度表明，這些DNA分子是含有一條15N鏈和一條14N鏈的雜合雙鏈。如果讓細(xì)胞在“輕”介質(zhì)中增殖兩代，所提取的DNA可被CsCl密度梯度平衡超離心分離成兩條帶，其中一條帶是“重”“輕”雜合雙鏈DNA，另一區(qū)帶DNA則完全是由“輕”鏈(14N)組成。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了DNA復(fù)制是半保留的。

　　所有的DNA聚合酶都是以5'—三磷酸脫氧核苷為底物，以單鏈DNA為模板按5'→3'方向合成，這是DNA聚合酶的催化特性所決定的。DNA復(fù)制時(shí)親本DNA雙鏈?zhǔn)侵鸩奖唤忾_的，兩條DNA模板鏈?zhǔn)欠雌叫械�，即一條鏈的走向是5'→3'，另一條鏈的走向是3'→5'。以3'→5'鏈為模板鏈的DNA，其合成與復(fù)制叉移動(dòng)方向一致，所以可以連續(xù)地合成;而在以5'→3'鏈為模板鏈的DNA的合成與復(fù)制叉移動(dòng)方向相反，所以只能是模板鏈解開一段，DNA復(fù)制一段，因此是半不連續(xù)的。

　　7. 決定DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性的因素有：①DNA聚合酶具有模板依賴性，復(fù)制時(shí)dNTP按A-T、G-C堿基配對(duì)規(guī)律對(duì)號(hào)入座，使子代DNA與親代DNA核苷酸順序相同，但有大約10-4的錯(cuò)配;②DNA聚合酶Ⅰ，Ⅲ均有3'→5'外切酶活性，有糾正錯(cuò)配的校正作用，使錯(cuò)配減至10-6。③再經(jīng)錯(cuò)配修復(fù)機(jī)制，使錯(cuò)配減至10-9以下。通過上述三種機(jī)制保證復(fù)制的準(zhǔn)確性。

　　8.要點(diǎn)：見 名詞解釋“反轉(zhuǎn)錄”。病毒的單鏈RNA在病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后被釋放出來，此RNA帶有與模板互補(bǔ)的tRNA引物，病毒的反轉(zhuǎn)錄酶以此RNA為模板，從引物的3'-OH端，按堿基互補(bǔ)原則以5'→3'方向合成DNA鏈(-)，形成RNA—DNA雜交分子，然后反轉(zhuǎn)酶發(fā)揮RNA水解酶活性，水解雜交分子中的RNA鏈，最后以新合成的DNA鏈(-)為模板，合成另—條DNA鏈(+)，形成雙鏈DNA分子(稱為前病毒)整合到宿主基因組中，隨宿主基因組的復(fù)制而復(fù)制，并可被激活而轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生病毒RNA(+)，此RNA可翻譯病毒蛋白質(zhì)，可作為后代病毒RNA。

　　9.要點(diǎn)：DNA的生物合成包括DNA半保留復(fù)制、DNA的損傷修復(fù)和反轉(zhuǎn)錄。

　�、貲NA半保留復(fù)制(見名詞解釋);

　�、贒NA的損傷修復(fù) 在某些理化、生物學(xué)因素作用下，DNA鏈發(fā)生堿基突變、缺失、交聯(lián)或鏈的斷裂等損傷后，可進(jìn)行修復(fù)。修復(fù)方式有光修復(fù)、切除修復(fù)、SOS修復(fù)與重組修復(fù)，其中以切除修復(fù)最常用。即：首先核酸內(nèi)切酶切開損傷處的5'端，出現(xiàn)正常的3'端，并由此開始然后以互補(bǔ)的DNA鏈為模板，dNTP為原料，在DNA聚合酶作用下5'→3'方向合成新的DNA片段;再由核酸外切酶水解已切開的損傷DNA片段;最后連接酶連接形成完整的DNA鏈。

　�、鄯崔D(zhuǎn)錄(見名詞解釋)

　　10.要點(diǎn)：①自身復(fù)制過程中發(fā)生的錯(cuò)誤;②外界環(huán)境的影響，如物理因素(紫外線、X-射線輻射等)，化學(xué)因素(各種誘變劑、抗菌素等)。造成嘧啶堿基形成二聚體及發(fā)生堿基錯(cuò)配、缺失和插入。

　　11.要點(diǎn)：①獲取外源目的基因;②選擇基因載體(通常為質(zhì)粒、噬菌體等)，使目的基因與載體連接，形成重組DNA;③通過轉(zhuǎn)化(或轉(zhuǎn)染)將重組DNA引入受體細(xì)胞;④從大量的受體細(xì)胞中篩選出帶有重組體的細(xì)胞進(jìn)行克隆。

　　意義：①利用基因工程技術(shù)，可以大量生產(chǎn)在一些正常細(xì)胞中產(chǎn)量很低的多肽物質(zhì)，用于醫(yī)藥等工業(yè)生產(chǎn)中;②定向改造生物基因結(jié)構(gòu)，以生產(chǎn)抗病強(qiáng)、品質(zhì)優(yōu)的各種農(nóng)副產(chǎn)品，提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值;③用于生命科學(xué)的基礎(chǔ)研究。

　　值得注意的是基因工程技術(shù)若使用不當(dāng)、管理不善，也會(huì)給人類帶來災(zāi)難。