三、免疫耐受形成的影響因素

　　機體受抗原刺激后的反應是很復雜的，是否形成耐受，耐受持續(xù)時間的長短等取決于動物種類、品系、遺傳性、機體的免疫狀態(tài)與抗原的性質、劑量、注射途徑等諸多因素。

　　(一) 動物的種屬、品系和遺傳性

　　不同種屬動物，在耐受性的發(fā)生上有所不同。家兔、大鼠、豚鼠、雞、山羊、靈長類和人都可致耐，但其難易程度不同。一般來講，小鼠較其他動物易于建立，小鼠中的CBL/G較BALB/c易于建立。另外，耐受性建立后，持續(xù)時間長短亦可因動物的種屬而異。用血清蛋白抗原注入各種新生動物，比較其致耐情況，發(fā)現(xiàn)家兔能產(chǎn)生完全耐受，持續(xù)長久;小鼠和豚鼠亦能產(chǎn)生完全耐受，但持續(xù)時間較家兔短，這種情況亦可因抗原不同而改變。另外，免疫耐受的形成和遺傳因素也有關，如對某種抗原的低反應性動物，則易被該抗原誘發(fā)免疫耐受。關于遺傳因素與耐受形成的關系中，MHC可能參與。有人報告用半抗原修飾的脾細胞誘發(fā)小鼠的耐受性時，被誘導的細胞除了要識別特異性抗原(脾細胞上修飾的半抗原)外，還須有MHC-Ⅱ類抗原分子的一致性(脾細胞上的與被誘導細胞上的相一致)，顯示耐受性的發(fā)生亦受MHC的約束。

　　(二) 機體免疫系統(tǒng)的發(fā)育狀態(tài)

　　一般認為機體在免疫系統(tǒng)上發(fā)育越不成熟，越容易建立耐受性。有人將無表面受體的未成熟細胞在適宜的條件下進行培養(yǎng)，24小時后有30%細胞成熟為有受體的B細胞，然后與適宜的抗原反應，B細胞可以分裂增殖為形成抗體的克隆。如果將無表面受體的細胞與A抗原一起培養(yǎng)在上述相同的條件下，24小時后再與A抗原起反應，則不能增殖形成抗體的克隆。因此，體外實驗同樣證實了免疫細胞如在未成熟時接觸了抗原，待其成熟后就不能對相應的抗原發(fā)生免疫應答。成年動物一般不易形成耐受性，除非是機體的免疫功能暫時受到抑制的情況下，如先用適當劑量的免疫抑制劑、射線、抗淋巴細胞抗體處理或胸導管引流除去循環(huán)中的淋巴細胞等情況下，然后注射抗原，才能誘導免疫耐受。成年動物中誘導的耐受性往往呈現(xiàn)為部分耐受，即對抗原的反應并不完全喪失而是反應性降低，或表現(xiàn)為“分裂耐受性(split tolerance)”，即對抗原的某些表位產(chǎn)生耐受性;或表現(xiàn)為免疫偏離(immune deviation)，即機體選擇性地產(chǎn)生體液免疫耐受性或細胞免疫耐受性。成年動物耐受性建立后，并不是終身保持的，保持時間的長短，取決于抗原在體內持續(xù)的時間。

　　(三) 抗原因素

　　1.抗原的理化性質

　　可溶性抗原比顆粒性抗原易于誘發(fā)耐受性，如血清白蛋白、丙種球蛋白都是很好的耐受原。耐受原與免疫細胞接觸越全面，則無反應性越徹底。血清蛋白分子不易被吞噬細胞清除，很易透出血管均勻地分布在血管外，易和免疫細胞接觸，是一種很好的耐受原，但如經(jīng)聚合以后，則耐受原性可能變?yōu)槊庖咴�性。某些多肽在加入佐劑時，可表現(xiàn)為免疫原，而在無佐劑時則成為耐受原。但是，一般的外來蛋白抗原容易被分解。因此，首次劑量必須大，才能維持一定的耐受時間。而對一些不易被分解的多糖抗原，耐受性則能持久存在。

　　2.抗原的劑量

　　一般說來，抗原的劑量大小與耐受性誘導的程度和持續(xù)時間的長短有密切的關系。大多數(shù)抗原在高劑量時能誘導免疫耐受，而低劑量時則引起免疫反應�？乖瓌┝吭酱螅�所引起的免疫耐受性越鞏固持久。由于機體出生后免疫系統(tǒng)逐漸成熟，誘發(fā)耐受性所需要的抗原劑量也隨年齡的增長而急劇增加，一旦造成耐受后，繼續(xù)注入小劑量抗原時，可延長耐受性。有些抗原，如牛血清白蛋白，又表現(xiàn)為高劑量或低劑量時均可引起耐受(前者稱為高帶耐受，后者稱為低帶耐受)，而中等劑量時，則可引起免疫反應。

　　3.抗原注入的途徑

　　抗原注入的途徑不同，對誘發(fā)耐受性的難易程度也不一樣。一般地，靜脈注射最易引起免疫耐受性，其次為腹腔注射，皮下注射最不容易引起耐受性。IgG或白蛋白注入門靜脈可致耐;而由周圍靜脈注入則引起免疫應答。

　　(四) 載體的性質 同一抗原決定基與不同的蛋白載體偶聯(lián)后誘導的新生期耐受的機制不同。Diener等用TNP-HGG和TNP-BSA在CBA/J小鼠出生后24小時注入小鼠體內，以后每周注射2次，到8～9周齡時，用TNP-HGG和TNP-BSA攻擊，結果發(fā)現(xiàn)二者均發(fā)生了對TNP的耐受無抗TNP的抗體產(chǎn)生。但是當用TNP-LPS、TNP-Ficoll攻擊時，二者就出現(xiàn)了差異，只有用TNP-HGG誘導的耐性無抗體產(chǎn)生，而用TNP-BSA誘導的小鼠則表現(xiàn)出能產(chǎn)生抗TNP的IgM抗體，用有限稀釋法對TNP特異的前體細胞的頻率分析也證明，TNP-HGG誘導的耐受小鼠，其TNP前體細胞數(shù)明顯較正常小鼠低，說明是存在著部分“排除”機制，但是用TNP-BSA誘導的耐受小鼠，TNP前體細胞數(shù)量與正常小鼠相同，說明不存在克隆排除現(xiàn)象，用細胞轉移試驗證明，由TNP-BSA誘導的免疫耐受是由Ts細胞引起的。

　　四、免疫耐受的終止

　　免疫耐受性建立以后，可以持續(xù)一段時間，但如無耐受原的再度刺激，則耐受性可以自然終止，也可以被誘導終止。

　　(一) 自然終止

　　新生期A鼠注射活的CBA小鼠淋巴細胞可以使成熟后的A鼠對CBA小鼠的移植皮片產(chǎn)生耐受，且持續(xù)一段較長的時間，因為CBA小鼠淋巴細胞在A鼠內繼續(xù)進行分裂和持續(xù)存在。這類細胞一旦消失，耐受性即終止。應用BSA作為耐受原注射于新生期小鼠，亦可誘發(fā)小鼠產(chǎn)生對BSA的耐受，將這種無生命的物質作為耐受原時，必須在機體內長期存在，如抗原被代謝破壞而失去抗原性時，則耐受性隨后將消失。BSA在體內會迅速被代謝破壞，因此耐受性自然消失較快，而DNP-D-GL(DNP與D谷氨酸和D賴氨酸共聚的結合物)由于不易被哺乳動物的酶所降解，被代謝破壞很慢，因而誘發(fā)的耐受性可以維持很長時間。

　　(二) 注入相關抗原

　　如果將致耐抗原結構改變后，再給動物注射，或使用與致耐原有交叉反應的抗原，可使已建立的耐受性破壞。如使家兔事先對BSA形成免疫耐受性，然后給耐受動物注射與BSA有微弱交叉反應的人血清白蛋白(HSA)，動物能重新對耐受原BSA起抗體反應，說明動物對BSA的耐受性被有效地終止。

　　(三) 注入與載體有交叉決定簇的抗原

　　將半抗原DNP連接在蛋白質載體BSA上，成為BSA-DNP，注入家兔，可使家兔形成對BSA-DNP致耐的T細胞(tTh)。再以BSA-DNP攻擊，由于缺乏T細胞信號，因此不出現(xiàn)抗體反應;但以HAS-DNP攻擊后，即可出現(xiàn)DNP抗體反應。這是因為HSA有部分不同，可刺激另外一些正常未致耐的Th細胞。新的Th識別HSA而被活化，向B細胞發(fā)出輔助信號，使B細胞分化、增強、產(chǎn)生DNP抗體，此即載體效應的應用。

　　(四) 注入同基因動物的正常淋巴細胞

　　有生命的耐受原如淋巴細胞、病毒等可在體內反復增殖，往往可持續(xù)存在較長時間，其耐受性不易消失，如注入相同基因動物的正常淋巴細胞，可以加速耐受性的消失，由于所注入的細胞并未對該抗原產(chǎn)生耐受性，故可對其發(fā)生免疫反應，并將其排斥，從而使耐受性中斷。如注入的淋巴細胞是原先被該抗原致敏的淋巴細胞，則排斥反應出現(xiàn)更快，如新生鼠A注入鼠淋巴細胞形成A、B的淋巴細胞嵌合體，則具有對A和B的淋巴細胞的耐受性。再注入從成年A鼠來的B鼠淋巴細胞致敏的A鼠細胞，則嵌合體中所有來自B鼠的淋巴細胞均被排斥，因而脫離嵌合狀態(tài)，對B鼠抗原就不再具有耐受性。