1.選D　限制性核酸內(nèi)切酶大多是特異性識別6個核苷酸序列，但也有識別序列由4、5或8個核苷酸組成的;PCR中耐高溫的DNA聚合酶只是在延伸階段發(fā)揮催化作用;載體質(zhì)粒上抗生素抗性基因可作為標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇，不是抗生素合成基因;目的基因?qū)�入了受體細胞不一定就都能正常表達。

　　2.選D　構(gòu)建重組質(zhì)粒需要用到限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，不需要DNA聚合酶，含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染植物細胞后，重組Ti質(zhì)粒的T­DNA整合到受體細胞的染色體上，而不是重組Ti質(zhì)粒整合到受體細胞的染色體上，導(dǎo)入受體細胞的目的基因表達后，轉(zhuǎn)基因植株方能表現(xiàn)出相應(yīng)性狀，若目的基因在受體細胞中不表達，轉(zhuǎn)基因植株不能表現(xiàn)出相應(yīng)性狀，⑤表現(xiàn)出抗蟲性狀則表明該植株細胞發(fā)生了基因重組，基因重組是可遺傳變異。

　　3.解析：(1)胚胎干細胞有發(fā)育的全能性，較易通過克隆獲得克隆后代。(2)通過同源交換用突變DNA替換靶基因，與交叉互換類似，屬基因重組。(3)在靶基因中插入neoR基因可以造成靶基因不能正常表達而失活，同時插入的neoR基因是抗生素抗性基因可作為標記基因用于基因敲除細胞的篩選。(4)由圖示可知該克隆小鼠的一對靶基因只敲除了一個，另一個還正常起作用，所以該克隆小鼠可視為雜合子，在形成配子時等位基因會發(fā)生分離，產(chǎn)生不含neoR基因和含neoR基因的兩種配子，比例為1∶1。若該克隆雌鼠與普通小鼠交配，理論上該克隆雌鼠產(chǎn)下抗新霉素小鼠與不抗新霉素小鼠的比例也為1∶1。因此其后代并不會都含neoR基因�！胺�合需要的小鼠”應(yīng)當是兩個靶基因都敲除的個體，可以讓該克隆小鼠與多只普通小鼠交配，讓子代與該克隆小鼠回交或子代小鼠間自由交配，篩選突變型的純合子。

　　答案：(1)發(fā)育全能性　(2)基因重組

　　(3)使靶基因失活和用于基因敲除細胞的篩選

　　(4)①否　因為該克隆小鼠可視為雜合子，在形成配子時等位基因會發(fā)生分離，產(chǎn)生不含neoR基因和含neoR基因的配子�、谙茸屧摽寺⌒∈笈c多只野生型小鼠交配然后讓子代與該克隆小鼠回交或子代小鼠間自由交配，篩選突變型的純合子　③1∶1

　　4.解析：本題中培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是獲得鐵含量比普通大米高的大米，因此目的基因為鐵結(jié)合蛋白基因，要大量獲得此基因一般采用PCR技術(shù)進行擴增。要構(gòu)建重組質(zhì)粒要用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒。將外植體培養(yǎng)成試管苗的過程要用到不同的培養(yǎng)基，各培養(yǎng)基最明顯的差別在于所添加植物激素的比例不同。

　　答案：(1)目的基因　PCR

　　(2)含目的基因的DNA片段　質(zhì)�！�CaCl2　(3)含有重組質(zhì)粒的愈傷組織　生長素和細胞分裂素的濃度比例　(4)種子中鐵含量

　　5.解析：進行基因工程操作時，首先要獲取目的基因，其方法有多種：從基因文庫中獲取、人工合成目的基因或PCR合成等。在構(gòu)建基因表達載體的過程中，用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。圖中的受體細胞是細菌，導(dǎo)入后，需檢測和篩選。從圖中可以看出，最終是通過對照實驗來檢驗轉(zhuǎn)基因細菌對土壤中殘留農(nóng)藥的分解能力。

　　答案：(1)從基因文庫中獲取　人工合成目的基因或PCR合成　耐熱的DNA聚合酶　限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶　(2)氯化鈣溶液　(3)紅霉素抗性基因　紅霉素　(4)油菜素內(nèi)酯能否促進土壤中農(nóng)藥的分解

　　6.(1)BglB酶是嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的一種耐熱纖維素酶，因此在該菌體內(nèi)存在相應(yīng)的基因，利用PCR擴增bglB基因時，應(yīng)選用嗜熱土壤芽孢桿菌的基因組DNA作模板。(2)要使目的基因插入在啟動子和終止子之間，而且不能破壞啟動子、終止子、復(fù)制原點、抗生素抗性基因等部位，只能選用Nde Ⅰ和BamH Ⅰ限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，因此在擴增的bglB基因的兩端需分別引入Nde Ⅰ和BamH Ⅰ不同限制酶的識別序列。(3)bglB基因能夠編碼BglB酶(一種纖維素酶)，BglB酶能分解纖維素。大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入bglB基因的大腸桿菌能分泌有活性的BglB酶，獲得了降解纖維素的能力。(4)根據(jù)圖1可知，80 ℃下BglB酶活性接近于0，由圖2可知，BglB酶在80 ℃保溫30分鐘后，其相對活性為0，因此80 ℃保溫30分鐘后，BglB酶會失活;BglB酶的最適溫度在60～70 ℃之間，而在70 ℃下保溫一段時間后酶活性逐漸降低，因此為高效利用該酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在60 ℃。(5)在PCR擴增bglB基因的過程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率，該過程中誘變劑只針對bglB基因進行誘變，而用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽孢桿菌，是針對嗜熱土壤芽孢桿菌內(nèi)的所有基因進行誘變，A正確;基因突變是不定向的，用誘變劑處理bglB基因不能產(chǎn)生定向突變，B錯誤;在PCR擴增bglB基因的過程中，加入誘變劑可快速累積突變，而用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽孢桿菌則不能，C正確;BglB酶是由bglB基因編碼的，基因突變是指基因的內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變(堿基對的增添、缺失或改變)，可能會導(dǎo)致酶的氨基酸數(shù)目改變，D錯誤。

　　答案：(1)嗜熱土壤芽孢桿菌

　　(2)NdeⅠ　BamHⅠ

　　(3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶

　　(4)失活　B　(5)A、C