思維激活
判斷正誤
(1)利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量小的先洗脫出來( )。
(2)在電泳過程中，蛋白質(zhì)分子的移動(dòng)速度，與分子本身的大小和形狀無關(guān)，而與所帶電荷的差異有關(guān)( )。
(3)在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，電泳遷移率完全取決于分子的大小( )。
答案 (1)× (2)× (3)×
血紅蛋白提取和分離過程的考查
(·廣東理綜，5)以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述，不正確的是( )。
A.洗滌紅細(xì)胞時(shí)，使用生理鹽水可防止紅細(xì)胞破裂
B.豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核，提純時(shí)雜蛋白較少
C.血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監(jiān)測(cè)
D.在凝膠色譜法分離過程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動(dòng)慢
解析 豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核，提純時(shí)雜蛋白較少，是提純血紅蛋白的理想材料。提純血紅蛋白分四步：紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析，其中洗滌紅細(xì)胞時(shí)，要用生理鹽水反復(fù)洗滌，既要將紅細(xì)胞洗滌干凈，又要不破壞紅細(xì)胞，然后再用蒸餾水和甲苯使紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白。分離提純的血紅蛋白時(shí)用凝膠色譜法，是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)移動(dòng)速度較快;血紅蛋白的顏色可用于觀察紅色區(qū)帶的移動(dòng)情況，并據(jù)此判斷分離效果。
答案 D
[對(duì)點(diǎn)強(qiáng)化]
紅細(xì)胞中含有大量的血紅蛋白，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來提取和分離血紅蛋白。下列關(guān)于血紅蛋白提取和分離的敘述，錯(cuò)誤的是( )。
A.血紅蛋白提取和分離一般按照樣品處理―→粗分離―→純化―→純度鑒定的順序進(jìn)行
B.純化過程中要用生理鹽水充分溶脹凝膠來配制凝膠懸浮液
C.粗分離中透析的目的是去除相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)
D.可經(jīng)SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定
解析 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。提取和分離血紅蛋白時(shí)，首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品處理;再通過透析法除去相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離;然后通過凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜蛋白除去，即樣品純化，純化過程中凝膠應(yīng)用蒸餾水充分溶脹后，配制成凝膠懸浮液，而不是用生理鹽水;最后經(jīng)SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。
答案 B
?歸納比較
1.分離DNA、PCR技術(shù)、分離蛋白質(zhì)的比較
分離DNA PCR技術(shù) 分離蛋白質(zhì) 實(shí)驗(yàn)原理 DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，且不溶于冷酒精 利用DNA熱變性原理體外擴(kuò)增DNA 依據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小不同來分離蛋白質(zhì) 實(shí)驗(yàn)過程 選取材料―→破碎細(xì)胞釋放DNA―→除雜―→DNA析出與鑒定 變性―→復(fù)性―→延伸 樣品處理―→凝膠色譜操作 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 獲得較純凈的DNA 獲得大量DNA 相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離 實(shí)驗(yàn)意義 為DNA研究打下基礎(chǔ) 解決了DNA研究中材料不足的問題 為蛋白質(zhì)的研究和利用提供了原材料 2.比較瓊脂糖凝膠電泳和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
(1)從載體上看，利用瓊脂糖凝膠作為載體的是瓊脂糖凝膠電泳，利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠作為載體的是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。
(2)從依據(jù)上看，利用了分子帶電性質(zhì)差異和分子大小的是瓊脂糖凝膠電泳，僅利用了分子大小的是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。
(3)從優(yōu)點(diǎn)上看，瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單，電泳速度快，樣品不需處理，電泳圖譜清晰，分辨率高，重復(fù)性好;SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳消除了凈電荷對(duì)遷移率的影響，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。
