二、簡(jiǎn)答題(共40分)
11.(10分)(2014·福建卷)Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：
(1)步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的________。
(2)步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到________期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。
(3)步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體�？梢愿鶕�(jù)Rag2基因的________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有________酶的酶切位點(diǎn)。
(4)為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的________，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。
解析 (1)核移植是把體細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中。(2)囊胚期才有內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。(3)可根據(jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，要把目的基因和表達(dá)載體直接連接，目的基因和表達(dá)載體應(yīng)具有相同酶的酶切位點(diǎn)。(4)欲檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，需提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，進(jìn)行抗原—抗體雜交實(shí)驗(yàn)。
答案 (1)細(xì)胞核
(2)囊胚
(3)核苷酸序列 Hind Ⅲ和Pst Ⅰ
(4)蛋白質(zhì)
12.(15分)(2013·天津卷)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質(zhì)體可使其染色體片段化，并喪失再生能力，再利用此原生質(zhì)體作為部分遺傳物質(zhì)的供體與完整的花椰菜原生質(zhì)體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株，流程如下圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
(1)過(guò)程①所需的酶是______________。
(2)過(guò)程②后，在顯微鏡下觀察融合的活細(xì)胞中有供體的________存在，這一特征可作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。
(3)原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是______________。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)________再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。
(4)若分析再生植株的染色體變異類型，應(yīng)剪取再生植株和________植株的根尖，通過(guò)________、________、染色和制片等過(guò)程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。
(5)采用特異性引物對(duì)花椰菜和黑芥基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到兩親本的差異性條帶，可用于雜種植株的鑒定。下圖是用該引物對(duì)雙親及再生植株1～4進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果。據(jù)圖判斷，再生植株1～4中一定是雜種植株的有________。
(6)對(duì)雜種植株進(jìn)行________接種實(shí)驗(yàn)，可篩選出具有高抗性的雜種植株。
解析 本題考查植物細(xì)胞工程、染色體變異的實(shí)驗(yàn)鑒定以及高抗性的雜種植株的篩選等相關(guān)知識(shí)。(1)去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體需要用纖維素酶和果膠酶處理。(2)葉肉細(xì)胞含有葉綠體，因此通過(guò)PEG誘導(dǎo)融合的雜種細(xì)胞應(yīng)含有葉綠體，以此作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。(3)原生質(zhì)體失去了細(xì)胞壁的保護(hù)作用，因此原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇，使原生質(zhì)體處于等滲溶液中，以維持原生質(zhì)體正常形態(tài)。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)細(xì)胞壁再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。(4)要判斷染色體變異的類型，應(yīng)剪取再生植株、花椰菜和黑芥植株的根尖，通過(guò)解離、漂洗、染色、制片等過(guò)程制成裝片，然后進(jìn)行顯微觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。(5)根據(jù)兩親本的差異性條帶，可知再生植株1、2和4既有花椰菜的條帶，又有黑芥的條帶，因此再生植株1、2和4一定為雜種植株。(6)要篩選出高抗性的雜種植株，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的病原體接種實(shí)驗(yàn)，即接種黑腐病菌。
答案 (1)纖維素酶和果膠酶
(2)葉綠體
(3)保持原生質(zhì)體完整性 細(xì)胞壁
(4)雙親(或花椰菜和黑芥) 解離 漂洗
(5)1、2、4
(6)黑腐病菌
