第四節(jié) 藥物血漿蛋白結(jié)合率常用測(cè)定方法

　　1. 平衡透析法

　　原理：利用與血漿蛋白結(jié)合的藥物不能通過(guò)半透膜這一原理，將蛋白置于一個(gè)隔室內(nèi)，用半透膜將它與另外一個(gè)隔室隔開(kāi)，游離藥物可以自由從半透膜自由透過(guò)，而與血漿蛋白結(jié)合的藥物卻不能自由透過(guò)半透膜，待平衡后，半透膜兩側(cè)隔室的游離藥物濃度相等。

　　注意事項(xiàng)：

　　①道南效應(yīng)：由于蛋白質(zhì)和藥物均帶電荷，膜兩側(cè)藥物濃度即使在透析達(dá)到平衡后也不會(huì)相等。采用高濃度的緩沖液或加中性鹽溶液可以最大限度地降低這種效應(yīng)。

　�、谒幬镌诎胪改ど嫌袩o(wú)保留：藥物與膜的吸附影響因素較多，結(jié)合程度取決于藥物的特點(diǎn)及膜的化學(xué)特性，當(dāng)結(jié)合程度很高時(shí)，就會(huì)對(duì)結(jié)果影響較大�？稍O(shè)立一個(gè)對(duì)照組，考察藥物與半透膜的吸附程度，如果吸附嚴(yán)重，就應(yīng)該考慮換膜或者采用其他研究方法。

　�、劭瞻赘蓴_：有時(shí)從透析膜上溶解下來(lái)的一些成分會(huì)影響藥物的測(cè)定，如用紫外或熒光法，因此在實(shí)驗(yàn)之前應(yīng)該對(duì)膜進(jìn)行預(yù)處理，盡可能去除空白干擾。

　　④膜完整性檢驗(yàn)：透析結(jié)束后，要檢查透析外液中是否有蛋白溢出，即檢查半透膜的穩(wěn)定性，如有蛋白溢出，需換膜重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

　�、輰�(shí)驗(yàn)通常需要較長(zhǎng)時(shí)間才能達(dá)到平衡，故最好是在低溫環(huán)境下進(jìn)行，以防蛋白質(zhì)被破壞。

　　2. 超過(guò)濾法

　　原理：通過(guò)藥物、藥物血漿蛋白結(jié)合物的分子量的差異而將兩者分開(kāi)。與平衡透析法不同的是在血漿蛋白室一側(cè)施加壓力或超離心力，使游離藥物能夠快速地透過(guò)半透膜而進(jìn)入另一個(gè)隔室，而結(jié)合型藥物仍然保留在半透膜上的隔室內(nèi)。